革兰染色正确顺序：1、涂片固定；2、草酸铵结晶紫染1分钟；3、蒸馏水冲洗；4、加碘液覆盖涂面，染约1分钟；5、水洗，用吸水纸吸去水分；6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分；7、蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗；8、干燥，镜检。

　　革兰染色步骤正确顺序

　　革兰氏染色是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性与革兰氏阴性。这一染色方法由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。

　　原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色。

　　而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。